摘要: 从原理、 基本步骤和优缺点等几个方面对农杆菌介导法、 基因枪法、 超声波介导法、 子房注射法和花粉管通道法等 5种常用的植物转基因技术进行了简要介绍。 关键词: 农杆菌介导法;基因枪法; 子房注射法;花粉管通道法; 原理;基本步骤。
Abstract: from several aspects such as the principle， basic steps and advantages and disadvantages of agrobacterium mediated method， gene marksmanship， ultrasound mediated method， ovary injections and the method of pollen tube channels five kinds of plant transgenic technology in common use are briefly introduced.
Key words: agrobacterium mediated method;Gene marksmanship.Ovary injections;Pollen tube channel;The principle;Basic steps.
植物转基因技术是通过各种物理的、 化学的和生物的方法将从动物、 植物及微生物中分离的目的基因整合到植物基因组中， 使之正确表达和稳定遗传并且赋予受体植物预期性状的一种生物技术方法。 世界上第一种转基因植物是一种含有抗生素药类抗体的烟草，1983年培育成功。世界上第一种转基因食品是1993年投放美国市场的转基因晚熟西红柿。转基因农作物可能同时具有高产、优质、抗病毒、抗虫、抗寒、抗旱、抗涝、抗盐碱、抗除草剂等多重优点，因此中国科学院院士、华中农业大学教授张启发曾指出：“农业转基因技术可保障农业的可持续发展，是解决世界温饱问题的根本途径。”
植物转基因技术已在作物改良和育种领域发挥了重要作用。通过植物转基因技术，一些来自于动物、 植物及微生物的有益基因如抗病 /虫基因、 抗非生物胁迫性状基因及特殊蛋白基因已被转化到农作物中以改良现有的农作物和培育新的农作物品种。以 DNA 重组技术为基础的植物转基因技术极大地扩展了基因信息的来源， 打破了远缘物种间自身保持遗传稳定性的屏障。植物转基因技术已应用到玉米、 水稻、 麦、 大豆和棉花等许多农作物。同时， 该技术也正在被尝试用于茄子和草莓等其它的作物中 。
目前，根据转基因植物的受体类型，植物转基因方法可以分为 3大类: 以外植体为受体的基因转化方法， 如农杆菌介导法、 基因枪法和超声波介导法; 以原生质体为受体的基因转化方法，如聚乙二醇法、 电击法、脂质体法及磷酸钙-DNA 共沉淀法; 以种质系统为受体的基因转化方法， 如子房注射法和花粉管通道法 [1]。由于以原生质体为受体的基因转化方法有原生质体培养难度大，培养过程繁杂， 培养工作量大且培养技术不易掌握;原生质体再生植株的遗传稳定性差、 再生频率低并且再生周期长; 相关的转化方法的转化率低、 效果不理想等缺点， 所以该类基因转化方法未被作为植物转基因的常规方法广泛使用 [2]。本文将对农杆菌介导法、 基因枪法、 超声波介导法、 子房注射法和花粉管通道法的原理、 基本步骤和优点。
1 农杆菌介导法
1.1 农杆菌转化的基本原理
农杆菌是一种天然的基因转化系统.农杆菌分为根瘤农杆菌和发根农杆菌.根瘤农杆菌中含有肿瘤诱导质粒(Ti)，其上含有可转DNA(T-DNA)区、毒性区 (Vir区) 以及冠瘿碱代谢基因编码区.T-DNA两端是两个25 bp的重复序列，分别称为左边界和右边界，两个边界序列之间是生长素和细胞分裂素合成基因以及冠瘿碱合成基因.Vir区中含有多个基因段，如VirA、VirB、VirC、VirD、VirE、VirG、VirH等，每个基因段都含有多个基因.当植物受到伤害时，分泌含有酚类化合物的汁液，如乙酰丁香酮等，这些酚类化合物一方面通过染色体毒性基因(chvA、chvB等)介导的催化作用促使农杆菌向植物受伤部位移动并附着于植物细胞表面;另一方面则被Ti质粒上由VirA和VirG组成的双组分调节系统识别，从而诱导其他Vir基因的表达.VirD1和VirD2共同作用，由T-DNA右边界开始向左边界切割产生一条T-DNA单链(T-链)，T-链5&39;末端与一分子VirD2结合，其余部分与VirE2结合，组成T-复合体.T-复合体被转移到农杆菌外，通过植物细胞壁上VirB蛋白组成的通道进入到植物细胞内.VirD2和VirE2上的核定位信号被转运蛋白识别，经主动运输过程通过核孔进入细胞核内，在VirD2的帮助下，入植物核染色体中，完成T-DNA由农杆菌向植物的转移及整合过程[3].
1.2 农杆菌介导法的基本步骤
( 1)诱导目标植物外植体; ( 2)构建含有目的基因的质粒; ( 3)质粒导入合适的农杆菌菌株中及该菌株的活化过程; ( 4)植物愈伤组织的微伤口处理及农杆菌侵染; ( 5)共培养及脱菌处理; ( 6)愈伤组织筛选、 分化与植株再生; ( 7)再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测; ( 7 )转基因 T1代的目标性状鉴定[ 4，5]。
1.3 农杆菌介导的转化技术与其他方法相比，具有十分明品的优点
1.农杆菌Ti质粒基因转化系统足H前研究最多、理论机理最清楚，技术方法最成熟、应用最广泛的趣因转化途校。 2.利用天然的转化载体系统，转化频率高，转化效果好。3.能导入大片段的DNA 。4.外源基闲多以单拷贝插入，较少出现IP基化和基因沉默现象，遗传稳定性好，且多数符合盂德尔遗传规律。农杆菌介导法的缺点足需要建立植株再生体系，并需要经历繁琐的原生质体或组织培养过[6]。 2 基因枪法
2.1 基因枪法的原理
利用基因枪产生的高压动力冲击波将包裹外源 DNA的重金属颗粒 (如钨粉、 金粉等 )射穿植物细胞壁和细胞膜，射入植物细胞， 使外源 DNA随机整合到植物细胞染色体中， 达到使外源 DNA 在受体植物中正常表达和稳定遗传的目的[7]。
2.2 基因枪法的基本步骤
( 1 )诱导目标植物外植体;( 2)构建含有目的基因的质粒或制备外源 DNA 样品; ( 3)重金属颗粒的外源基因包被过程; ( 4)植物愈伤组织的前处理; ( 5)基因枪轰击过程; ( 6)愈伤组织筛选、 分化与植株再生; ( 7)再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测 [8]
2.3 基因枪法的优点所在
小麦遗传转化中使用最广泛的一种方法，它没有宿主的限制、具有广泛的祀受体类型、操作简便快捷、可控度高等优点。该技术可用植物组织、愈伤组织、悬浮细胞系和胚作为遗传转化的受体材料，从而避开了从植物原生质体再生植株的难题，又解决了农杆菌的宿主范围限制的问题 [9]。作为基因枪转化的受体，不同的研究者有不同的选择，采用胚性愈伤组织、幼胚、幼穗等作为受体进行转化均有获得成功的报道。
3 花粉管通道法
20世纪 70年代末期， 在 DNA 片段杂交假设理论和对植物开花受精过程的解剖学及细胞学特征研究的基础上，我国科学家周光宇[10]等推测外源 DNA 可以通过花粉管经过的珠心通道进入受精胚囊， 转化进入精卵融合细胞、 早期合子及早期胚细胞。随后， 周光宇等创建花粉管通道技术并通过该技术将外源 DNA导入陆地棉， 成功地培育出抗枯萎病的新品种 [11]。目前，花粉管通道法已成功应用于棉花、水稻、小麦，大豆等农作物的改良和育种工作。
3.1 花粉管通道法的原理
在植物授粉后的特定时期内， 利用精卵融合细胞、 早期合子及早期胚细胞无细胞壁和核膜结构的特点， 以柱头内形成的花粉管为通道，将外源 DNA导入受精胚囊。在受精后细胞基因组合成和复制活跃的条件下， 将外源 DNA 随机整合到受体植株基因组上
3.2 花粉管通道法的基本步骤
( 1)目的基因的制备;( 2)根据受体植物受精后，花粉管形成的情况和精卵细胞融合的时间， 确定最佳时间，进行外源 DNA导入; ( 3)转化种子及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测[12]。
3.3 花粉管通道法的优点
操作简单; 对受体植物无种类的要求; 对外源 DNA无特别要求; 无组织培养过程; 转化速度较快， 育种周期短等。其缺点是:该方法的具体机制不清， 且缺乏分子生物学证据; 受自然条件、 环境条件及受体植物的花期等生理条件限制;该方法要求充分了解受体植物开花受精的时间; 该方法要求很强的经验性，对某些农作物的操作难度较大;转化率低; 结果的可重复性差;在转基因植株的后代中，外源基因的稳定遗传性差[13]
4 超声波介导法
作为一种新创建的物理学基因转化方法， 超声波介导法已被用于真核生物的基因转化研究和人类基因治疗领域。在农作物基因转化研究中， 超声波介导法已成功地将外源 DNA转导入烟草和甜菜的原生质体、 玉米和小麦的未成熟胚及烟草的叶片中。目前， 该方法常与农杆菌介导法共用以提高外源 DNA的转化效率 [14]。超声波介导法的原理是: 利用超声波的空化作用， 在细胞膜上产生可恢复的渗透孔空洞， 从而使外源 DNA进入细胞。
4.1 超声波介导法的基本步骤
( 1)目标植物外植体的制备; ( 2)目的基因的制备; ( 3)超声波处理; ( 4)转化受体俞伤组织的筛选与植株再生; ( 5)再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测 。超声波介导法的优点有: 该方法不受宿主范围的限制，可以将外源基因导入任何基因型的植物细胞内; 该方法可以避免对细胞的机械性损伤 有利于原生质体的存
4.2 超声波介导法的优点
该方法不受宿主范围的限制，可以将外源基因导入任何基因型的植物细胞内;该方法可以避免对细胞的机械性损伤， 有利于原生质体的存活;该方法操作简便、 设备便宜等优点。由于超声波介导法也存在外源 DNA随机整合及外源 DNA 拷贝数多等问题。因此，该方法也会导致转基因后代的突变率提高、整合的 DNA丢失及基因沉默等现象。
5 子房注射法
子房注射法是一种育种工作中经常使用的简便易行的植物转基因方法。1993年， 丁群星及其同事首次使用子房注射法将 Bt基因导入玉米子粒中并成功获得了具有一定玉米螟抗性的转基因玉米。目前， 子房注射法成功用于玉米、 小麦、 甜瓜和南瓜[15]等农作物的转基因育种工作中。
5.1 子房注射法的原理
使用微注射针或显微注射仪将外源 DNA注入处于减数分裂期的受体植物的子房中， 借助子房产生的压力和卵细胞产生的吸收力， 外源 DNA进入受精的卵细胞中，借助合子胚旺盛分裂过程中基因组的复制、 重组、 缺失或易位等现象， 外源 DNA 被随机整合到受体染色体上[ 16]。
5.2 子房注射法的基本步骤
( 1)目的基因的制备; ( 2)根据受体植物受精后其子房的变化特点， 确定最佳时间，进行外源 DNA 注射或将离体的受精子房进行外源 DNA注射，再对该离体子房进行培养; ( 3)转化种子及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测。
子房注射法的优点: 该方法无需组织培养过程， 因此实验过程简单，操作便捷;该方法所用的仪器设备简单便宜;外源 DNA 直接注射进入子房可以提高转化率;该方法可以直接得到转化种子， 因此缩短了育种周期。其缺点是 田间转化过程的工作量大 转化过程中 子房受。
6 几种常用基因转化法的比较
7 结语
植物转基因技术是一种技术创新，是现代科技革命的一个重要方面，在农业、生物、医学、食品、环保和能源领域具有广阔的发展前景。植物转基因技术代表了现代农业科技发展的方向，将为农作物的持续增产和解决人口爆炸所造成的粮食危机做出巨大贡献。植物转基因技术的广泛应用符合中国国情、顺应时代要求，对构建和谐社会、促进当代社会可持续发展有重要意义[18]。
在过去的几十年里，转基因技术经历了从诞生、成长到大规模商业化应用等阶段，在解决人类面临的环境恶化、资源匾乏、效益衰减等问题上发挥了巨大的作用。在充分利用转基因技术的同时，我们也应重视转基因作物的生态安全和食品安全问题，以科学、严谨的态度客观分析转基因作物可能造成的影响，研究对策，共同推进转基因作物育种及推广应用工作的发展。
参考文献
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[7] 郑博 基因枪法介导拟南芥AtMYB44基因转化小麦的研究 安徽大学学报. ，4. 15~ 18
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一.学习目的
1.了解组态软件的使用环境及其基本功能
2.掌握组态软件的使用方法
3.掌握监控组态软件的组成及其分类
二.学习使用仪器及软件
1.微机
2.软件
三.学习内容
1.组态软件的概述
2.工程管理器
3.分析曲线
四.学习体会及总结
五.参考文献
《电子商务项目管理》实践课程，以经济系与喜点传媒广告公司合作共建——梧州喜点传媒电子商务实习实训基地为依托，以“众淘商联”网上商城项目为中心对象，开展实践学习活动。八周的课程很快就过去了，这次课程是我们第一次真正接处电子商务方面的实习实训，虽然经过几次培训，但是到实习实训基地的时候我们还是有许多无法自己解决的问题，很难得的是我们还是在这次实习中学到了很多无法在课堂上学到的东西，让我们积累了丰富的实际经验，能够学以致用，适应市场发展需要，解决学习电子商务专业的我们就业难、就业质量不高的问题，全面提升同学们的综合能力。整个课程我们学习了电子商务项目建设的组织管理，“众淘商联“网上商城项目的营销策划(校企合作营销模拟演示会)，“众淘商联“网上商城项目网络技术运用情况，“众淘商联“网上商城项目网络广告PS 设计实践，六堡茶茶叶商行电子商务需求调查，下面对我们学习、实训的内容分块进行总结。
1、电子商务项目建设的组织管理
9月12日，在叶毅老师的安排下，我们10电子商务本科班的53名同学参观并学习梧州市喜点广告传媒策划有限公司的工作室及公司的管理模式。在老师、公司总经理江总、技术员的热情指引和讲解下，通过参观公司前台客服部、观看荣誉廊、参观试音室、工作职场、管理部、设计部的形式，我们领略了喜点广告传媒策划有限公司管理模式的企业文化和管理理念，参观过程中我们了解到，梧州市喜点广告传媒策划有限公司一直以来坚持以客户为本，以诚信为本、以人为本的经营理念、艰苦创业，拓展整合。喜点广告传媒策划有限公司的宗旨和理念：公司提供的不只是产品，更提供优质的全方位服务。
项目的管理就是要保证信息及时、正确地提取、收集、传播、存储以及最终进行处置，保证项目工作过程内部的信息畅通。它以项目总体利益最大化为目标，有效地进行项目的组织管理，并以协调和统一项目各方面的专项管理为主要内容，确保项目范围内的各项工作能够有机地协调配合进行，平衡项目各目标之间的冲突，保证项目实施过程各阶段的顺利实施，对项目的内部影响因素和外部影响因素同时进行全面管理和控制的综合性管理，使所有相关利益者对项目的目标、计划和任务达成一致的理解，从而保证在有限的时间内、有艰的成本内实现项目目标。对公司来讲，组织管理是公司的中枢纽带，从我们的角度出发，组织管理则是对我们自己的学习、生活、活动各方面的协调，在同样的有限时间内，如何学到更多的知识，更加完善自己使自己具备更高层次的组织管理能力。
2、“众淘商联“网上商城项目的营销策划(校企合作营销模拟演示会)
10月24日的模拟演示会由同学们扮演商家，就“众淘商联”网上商城项目向喜点传媒提出问题，使其继续完善“众淘商联”网上商城方案，通过大家的激烈研讨，我们了解到梧州本地消费者需要一个可以实时在线订购的社交生活体验平台，商家需要一个可以满足日常并持续的线上分销通道，社会需要一个更快、更方便的线上线下结合的生态娱乐圈。从大体上来看，O2O是我们熟悉的一个商业模式整合体，我们希望未来这个整合体在梧州整个电子商务中，以及整个互联网中的价值会不断放大，给当地用户带来更多创新体验服务。
企业营销策划就是在对企业内部环境予以准确地分析，并有效运用经营资源的基础上，对一定时间内的企业营销活动的行为方针、目标、战略以及实施方案与具体措施进行设计和计划，提高经营效率，提高竞争能力，力求企业价值最大化。本次模拟演示会，我们从学生的身份转变为商家的角色，尽可能地发挥自己的想象力找出“众淘商联”网存在的问题，我们在思维上进一步提升了自己，同时也更加清楚地认识到网络营销对于梧州的发展来说是一个重要的推动力。这次的模拟演示会是我们转换思维挖掘自己的时候，对我们今后的事业发展有积极促进的作用。经过演示会认识到当我们置身商业实战场景时，以商家经营管理者的身份，模拟管理商家财务、物流、生产、营销等重要过程，使我们明白一个企业营销策划绝不仅仅是在网站上简单买卖就可以，它需要一个详细的、谨慎的、准确的计划、判断和实施，它考验了我们在策划项目上的周全度，这是思维上一个质的飞跃。
3、“众淘商联”网上商城项目网络技术运用情况
“众淘商联”网上商城大量应用到了表单数据的提交于获取，对数据的提交与保存，还有就是对于页面之间的链接以及利用session方法对商品的保存于提取。该网站系统基本满足消费者的需求，但是还不够完善，在以后的进一步开发过程中有待改进完善。
“众淘商联”增加了项目开发的经验，对于团队之间的团结与合作，深入体会到了在团队开发过程中每个队员的重要性，以及团队开发之间的统一性。通过此次的培训学习，我悟出了个道理，学习东西就像软件开发一样，拿到一本书之后看看，提出自己未知的问题，进而分析该问题，读懂书学会去解决。我们了解了软件开发的大体过程，在当今竞争激烈的社会中只有学到本领才能有立足之地，软件开发、网站代码的编写，首先要有足够的耐心，要勇于面对密密麻麻的代码，无数遍的调试，和无数遍的修改，但是，当我们调试成功时，就会感到这些努力的意义、成功的喜悦。软件开发、网站代码的编写，还要注意借鉴，查看已有的例子的代码，这样可以节省大量的时间，同时也可以实现代码重用。此外，我们也知道，基础课程的重要，要学好一门编程语言，一定要动手，实践是最好的方法。
4、“众淘商联”网上商城项目网络广告PS 设计实践
9月21日两位喜点传媒广告有限公司技术骨干员对我们进行了网络广告PS 设计培训，同时就我们做的PS作业进行点评，在审美观、视觉、平面设计、黄金分割线等方面给予我们建议，每一位同学都看到了自己的不足之处，也学习了其他同学的优秀之处，学习喜点传媒的工作经验，吸取其中的精华。
在设计广告过程中，我深深地感受到作为设计者缺乏足够的市场和管理上的经验，做出的设计作品经常会与市场经济脱节，而作为管理者通常缺乏设计基础和审美能力，往往为了追求市场效益，过多地拘束设计师的思维与创新，忽略了设计要素的重要性，造成了设计的庸俗化。所以仅仅通过在学校所学的理论知识是远远不够的，这就需要我们去实践，走进设计公司，将所学理论与实践相结合，培养我们的设计感。通过社会实践，熟练专业技能，了解艺术设计机构，其部门、日常业务活动、整体状态。并从中认识到艺术设计活动与人力、资金、社会的关系。
5、六堡茶茶叶商行电子商务需求调查
10月17日老师带领我们参观六堡茶茶厂，让我们更加了解千年古都的梧州六堡茶的历史文化。六堡茶发源于梧州辖区的桂江两岸，山水相连，沃土成片，山岚雾嶂，温湿滋润非常适应种茶。其特有的地理气候环境生长出我国特有的黑茶。六堡茶受初级生产要素的支撑较强。另外，广西农业的科研力量一直比较强，在茶叶的科研上就有广西农垦茶叶研究所等专门研究机构。各个六堡茶生产企业也非常重视六堡茶的的生产技术水平，在技术和管理上聘用高级人才，使得六堡茶的发展有了相当的高级生产要素的支撑。 但是，由于历史原因，六堡茶乡老茶园稀少、茶产量不多、传统六堡茶制作出现断层的现象，需要较长时间的恢复。由于六堡镇的茶叶产量不够，需要调动周边地区的茶叶来补充，致使茶品外相、内质不一，市场较混乱，直接影响到六堡茶的销售，不良的销售又导致市场份额的缩小，最终的结果是六堡茶没法产生全国知名的大品牌和大商家。作为一个历史名茶，六堡茶的需求历来比较旺盛。早在清嘉庆年前后，马来西亚等地的侨胞中，就已普遍用六堡茶作治病驱痢和解暑的生活饮品，并以其特殊的槟榔香味而入选中国名茶之列，“畅销于穗、港、澳等埠”，其品质素以“红、浓、醇、陈”四绝而著称。六堡茶需求的另外一个方面是其收藏价值。六堡茶是属于类似普洱茶的一种黑茶，耐于久藏，越陈越醇的特点。 但是，由于宣传的力度还是不够，六堡茶在全国很多其他的地方还是很陌生的，在一定程度上限制了六堡茶市场的扩展。
建议 ：(1)政府需要加大教育投资，与企业共同创造专业性强的高级生产要素，为六堡茶产业的发展储备强有力的后劲。比如，加强对六堡茶的科研投入。(2)政府要鼓励自由竞争，政府需要很清醒的认识自己的使命是为产业的发展提供良好的国内竞争环境，过度的政府干预和保护，往往会阻碍产业的健康发展。寄希望于“一枝独秀”的企业出去闯荡江湖，或者寄希望于政府的优惠政策甚至保护措施来培育有竞争力的产业是很不明智的。(3)政府还需要制定相应的行业规范体系，来规范整个行业的发展，确保六堡茶产业的健康。(4)政府继续支持企业在全国、全球范围内对梧州六堡茶的品牌进行有力的宣传。(5)可在“众淘商联”网站上推广，也借助其他网站宣传推广，让更多的人知道了解梧州历史名茶六堡茶的文化和意义。
通过这门电子商务项目管理课程的实训“理论+实际操作+参观+案例”，使我们对电子商务有更深一层的了解，对国内外电子商务的发展有了进一步的认识。每周都要完成相应的任务，紧张的学习气氛，让我们养成了今日事今日毕、不拖不欠的良好习惯，这样的生活，很有节奏感，虽然遇到难题时会烦恼，但是会感觉很充实，自己学到了一些实用的知识，也深刻明白了实践的重要性，我们需要好好学习，好好锻炼，以后才能在职场上得到更多的机会。
随着经济全球化和信息技术的产业的迅速发展，电子商务将成为今后信息交流的热点，成为关注的领域，电子商务不断在各个领域发挥其重要性，不可替代的发展趋势。同时激励我们从现在开始就有竞争意识，从现在开始努力，明白需要哪些知识，需要从哪些方面完善自己，进而不断提高自己。
通过这次的实训，不断拓宽了自己的思路，了解电子商务企业的营销模式和营销过程，它在以后社会不可估量的作用，让我们更有信心相信通过老师的指导，我们的努力将会有更好的发展。实践出真理，八个星期的学习实训时间非常短，但是我们接触到新的东西却很多，这些东西给我们带来新的体验和新的体会。每一个同学在实训的过程中，都可以说遇到过挫折。尤其是有的时候操作得不到结果的时候，伴随而来的压力和毫无头绪的想法，常常令我们苦恼，也正是因为这样，使我对自己的能力有更清楚的认识。通过些实训，我认识到了要学好电子商务，要注重理论和实践相结合，理论固然重要，实训操作才能使我们更快的掌握这些知识。学校给我们这次的实训机会，从理论和操作这两方面融会我们的知识，为我们的学习和以后的工作铺垫了精彩的一幕，因此，我坚信，只要我用心去发掘，勇敢的去尝试，一定会有更大的收获和启发，只有这样才能为自己以后的工作和生活积累更多的丰富的知识和宝贵的经验。